人樁蛋白2(Pax2)試劑盒所使用的抗體具有高度特異性和親和力，能夠準(zhǔn)確地識別并結(jié)合目標(biāo)抗原，即使是低濃度的Pax2也能被有效檢測到，提高了檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。基于抗原抗體的特異性結(jié)合原理，只針對人樁蛋白2進(jìn)行檢測，避免了與其他相似蛋白或雜質(zhì)的交叉反應(yīng)，確保檢測結(jié)果的真實性，減少假陽性的出現(xiàn)。
具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性，在不同的實驗條件下，多次重復(fù)實驗?zāi)軌虻玫较嘟慕Y(jié)果，為科研工作者提供了可靠的數(shù)據(jù)支持，有利于實驗結(jié)果的分析。采用高質(zhì)量的固相載體，如孔底透明度高的微孔板，對抗體或抗原的吸附能力強(qiáng)，能使反應(yīng)更充分地進(jìn)行，同時也便于觀察顯色結(jié)果。
試劑盒經(jīng)過優(yōu)化處理，自身本底干擾較小，空白對照孔的吸光度值較低，從而突出了樣本的真實信號，進(jìn)一步提高了檢測精度。適用于多種類型的樣本，包括血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等，方便研究人員根據(jù)不同的研究需求選擇合適的樣本進(jìn)行檢測。
人樁蛋白2(Pax2)試劑盒的測定步驟：
1.準(zhǔn)備階段
-試劑平衡：從冰箱中取出試劑盒，在室溫下放置一段時間，使所有組分恢復(fù)到室溫。這一步驟很重要，因為溫度差異可能影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
-配置溶液：根據(jù)說明書的要求，用蒸餾水或去離子水稀釋濃縮洗滌液等需要的溶液，并充分混勻。注意準(zhǔn)確量取液體體積，避免誤差。
-設(shè)置孔位：在酶標(biāo)板上確定標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白對照孔的位置。一般來說，標(biāo)準(zhǔn)品孔用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以定量檢測樣本中的Pax2含量；空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)記物，用于校正儀器讀數(shù)時的基線值。
2.加樣環(huán)節(jié)
-標(biāo)準(zhǔn)品加樣：按照說明書規(guī)定的濃度梯度，向?qū)?yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品孔中分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品各50μL。這些標(biāo)準(zhǔn)品是已知含量的Pax2參考物質(zhì)，通過它們可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而推算出樣本中Pax2的濃度。
-樣本加樣：將待測樣本添加到預(yù)先設(shè)定好的樣本孔中，每孔加入的樣本量也應(yīng)遵循說明書的要求，通常也是50μL左右。確保加樣過程準(zhǔn)確無誤，避免交叉污染。可以使用移液器進(jìn)行準(zhǔn)確加樣。
-添加抗體與酶結(jié)合物：依次向每個孔中加入相應(yīng)的生物素化抗體以及鏈霉親和素-辣根過氧化物酶(HRP)復(fù)合物。這一步的目的是讓抗體與樣本中的Pax2特異性結(jié)合，而HRP則作為信號放大系統(tǒng)的一部分，后續(xù)可通過底物顯色來檢測信號強(qiáng)度。加完后輕輕晃動酶標(biāo)板，使液體充分混合均勻。
3.溫育反應(yīng)
-第一次溫育：將加好樣的酶標(biāo)板蓋上蓋子，置于特定溫度的培養(yǎng)箱中溫育一定時間，具體時間和溫度參照試劑盒說明書。在此期間，抗原抗體之間會發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。
-洗滌：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌每個孔多次，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。每次洗滌后都要盡量甩干孔內(nèi)殘留液體，防止干擾后續(xù)實驗步驟。洗滌次數(shù)不足可能導(dǎo)致背景過高，過多則可能洗掉已結(jié)合的成分，所以要按照說明書嚴(yán)格控制洗滌次數(shù)和方式。
4.顯色反應(yīng)
-加入底物：向洗滌后的每孔中加入TMB底物溶液，在避光條件下進(jìn)行第二次溫育。TMB在HRP的催化作用下會轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，且顏色的深淺與樣本中Pax2的含量成正比。
-終止反應(yīng)：達(dá)到規(guī)定的溫育時間后，向每孔中加入終止液(如硫酸)，此時藍(lán)色會迅速變?yōu)辄S色。加入終止液的順序要一致，以保證各孔間的反應(yīng)時間相同。
5.結(jié)果讀取與分析
-吸光度測定：立即使用酶標(biāo)儀在特定的波長處測定各孔的吸光度值。一般選擇450nm作為檢測波長。記錄下標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白對照孔的吸光度數(shù)據(jù)。
-繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本孔的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對應(yīng)的Pax2濃度，即可得到樣本中Pax2的含量。
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更新時間：2025-10-21 
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