小鼠ELISA試劑盒基于抗原抗體特異性結合原理

更新時間：2025-12-26

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　　小鼠ELISA試劑盒基于抗原抗體特異性結合原理，采用雙抗體夾心法等檢測模式。先將特異性抗體包被在微孔板形成固相抗體，加入待測樣本后，目標抗原與固相抗體結合，再加入酶標記的檢測抗體，形成“固相抗體-抗原-酶標抗體”復合物。洗滌去除未結合物質后，加入底物(如TMB)，酶催化底物顯色，顏色深淺與抗原量正相關。用酶標儀測定吸光度，通過標準曲線計算抗原濃度。

　　小鼠ELISA試劑盒的測定步驟：

　　1.樣本準備：推薦使用血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細胞上清或組織勻漿等樣本類型。血清/血漿樣本采集后應立即離心，取上清分裝保存于-80℃，避免反復凍融；組織樣本需在冰浴中勻漿，使用預冷的生理鹽水或RIPA緩沖液，勻漿后同樣離心取上清。所有樣本在使用前需恢復至室溫并充分混勻。

　　2.試劑準備：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水準確稀釋至工作濃度，現配現用。標準品按說明書梯度稀釋，建議使用多通道移液器以提高一致性。酶結合物與顯色液需避光保存，使用前平衡至室溫并輕柔混勻。

　　3.加樣操作：在酶標板上設置標準品孔、待測樣品孔和空白孔。標準品孔按照特定順序進行稀釋和加樣，確保每孔加樣量準確。待測樣品孔先加樣品稀釋液，再加待測樣品，輕輕晃動混勻。加樣時應將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁。

　　4.溫育與洗滌：用封板膜封板后置37℃溫育一定時間。溫育結束后，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置一段時間后棄去，重復多次，拍干。

　　5.加酶與再次溫育洗滌：每孔加入酶標試劑(空白孔除外)，重復溫育和洗滌步驟。

　　6.顯色與終止：每孔先加入顯色劑A，再加入顯色劑B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色。顯色適當時，每孔加終止液終止反應。

　　7.測定：以空白孔調零，在特定波長下測量各孔的吸光度值。根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。

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